總結ELISA試劑盒實驗中的失誤
點擊次數:786 更新時間:2016-05-26
.實驗人員應掌握實驗室基本操作具備基本素質和具有一定的實踐經驗。可以熟練使用實驗儀器、器械,善于總結和分析問題,對于實驗中出現的意外情況能穩重妥善解決。
2.在操作前必須仔細閱讀說明書,嚴格按照說明書要求進行規范操作,不同批號的試劑千萬不能混用。在反復試驗確定成立后方可改進。
3.必須嚴格控制反應時間,如果反應時間過長,酶會失有可能造成假陰性。
4.評估試劑的實用性,試劑是否穩定,對準確率的高低到頭重要。在使用試劑前,應進行陰、陽對照及樣品反復比照試驗,判定試劑符合要求后方可使用。
5.使用校對過的微量移液器可以排除自然誤差,移液器準確與否對定量檢測尤為重要。
6.加樣不僅要做到快速也必須保證準確。如若加樣不準確,酶生成物的量不能確定直接影響顯色結果。顯色的深淺及A值的測定與加入顯色劑和終止液的量有關,所以加樣需慎重。如果加樣遲緩會出現誤差,如果試劑長時間暴露在外,尤其室溫過高時,保存期會縮短甚至失效。
7.嚴格掌握顯色時間,如若顯色時間過短加入終止液反應終止后底物結合物的量過少,易出現假陰性。超過顯色要求時間后顯色,應判為假陽性,這可能與試劑本身有關。加顯色劑后立即顯色,不可報陽性,這可能是本底顯色的結果。
8.洗滌一定要*,如果洗板不*,酶結合物本底顯色會呈現假陽性。另外需要注意洗滌液要新鮮,現用現配,陳舊的洗滌液會出現本底增高現象,也可能會出現假陽性。