三叉奧斯特線蟲LAMP試劑盒對外源性干擾因素進(jìn)行簡要說明:
()標(biāo)本溶血 要注意避免出現(xiàn)嚴(yán)重溶血。血紅蛋白中含有血紅素基團(tuán),其具有類過氧化物的活性,因此,在以辣根過氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP)為標(biāo)記酶的ELISA測定中,如果血清標(biāo)本中血紅蛋白濃度較高,則其就很容易在溫育過程中吸附于固相,從而與后面加入的底物反應(yīng)顯色。
(2)標(biāo)本被細(xì)菌污染 標(biāo)本的采集及血清分離要注意盡量避免細(xì)菌污染。細(xì)菌菌體中除可能含有內(nèi)源酶對測定產(chǎn)生非特異性干擾外,還可能對抗原抗體等蛋白產(chǎn)生分解作用。另外標(biāo)本在保存中出現(xiàn)渾濁或絮狀物時,應(yīng)離心沉淀后取上清檢測。
(3)標(biāo)本貯存時間過長 標(biāo)本在低溫下保存時間過長,IgG可聚合成多聚體,在間接法ELISA測定中會導(dǎo)致本底加深、甚至出現(xiàn)假陽性結(jié)果。通常情況下血清標(biāo)本可在2~8℃下保存l周,冷凍保存時間會更長,但對于抗體或抗原含量低的標(biāo)本而言,則可能會因抗體掉價、抗原分解而出現(xiàn)假陰性結(jié)果。
(4)ELISA試劑盒標(biāo)本凝固不全 血液通常在采集后半小時后開始凝固,8~24h*凝固。如果在血液未凝固時即離心分離血清,則可因纖維蛋白原非特異吸附于微孔而造成假陽性結(jié)果。為了縮短標(biāo)本處理時間,可以在離心前將血液標(biāo)本置于溫箱中溫育或者采用帶分離膠的或于中加入適當(dāng)?shù)拇倌齽┮约铀傺宓姆蛛x。
(5)冷凍保存標(biāo)本避免反復(fù)凍融 標(biāo)本的反復(fù)凍融會因其所產(chǎn)生的機(jī)械剪切力對標(biāo)本中的蛋白等分子產(chǎn)生破壞作用,使抗體效價跌落從而引起假陰性結(jié)果,ELISA試劑盒所以測抗體的血清標(biāo)本如需保存作多次檢測,宜少量分裝凍存。此外,標(biāo)本在凍存時會因蛋白質(zhì)局部濃縮,分布不均,因此重新融解的標(biāo)本必須混勻,但不要進(jìn)行劇烈振蕩,反復(fù)顛倒即可。