哪些原因會導致Elisa試劑盒實驗的失???
點擊次數:478 更新時間:2021-07-20
Elisa試劑盒應用的范圍很廣,而且正在不斷地擴大,原則上Elisa試劑盒可用于檢測一切抗原、抗體及半抗原,可以直接定量測定體液中的可溶性抗原。
導致Elisa試劑盒實驗失敗的原因:
一、標本的影響
溶血標本及混有紅細胞的血清采用ELISA法檢測易產生假陽性??赡苁侨苎逯泻羞^氧化酶物質(紅細胞或血紅蛋白中的亞鐵血紅素),在洗滌過程中往往難以*洗脫,它可使H2O2釋放出原生態氧(O),從而催化底物四甲基聯苯胺生成可溶性的有色物質,即顯藍色,產生假陽性。所以嚴重溶血標本禁用。
二、標本受細菌污染
因菌體中可能含有內源性辣根過氧化物酶,因此,被細菌污染的標本同溶血標本樣,亦可產生非特異性顯色而干擾測定結果。
三、標本保存不當
在冰箱中保存過久的標本,在間接法ELISA測定中會導致本底過深、造成假陽性;為克服上述干擾,ELISA試劑盒測定的血清標本宜為新鮮采集;如不能立即測定,5d內測定的血清標本可存放于4℃,周后測定的血清標本應低溫凍存;凍存后融解的標本,蛋白質局部濃縮,分布不均,應充分混合后再測定,但混勻時應輕柔,不可強烈振蕩。
四、標本凝固不全
在工作中,有時為了爭取時間快速檢測,常在血液還未開始凝固時即強行離心分離血清,使血清中仍殘留部分纖維蛋白原,在ELISA測定過程中可以形成肉眼可見的纖維蛋白塊,易造成假陽性結果;因此血液標本采集后必須使其充分凝固后再分離血清。