小鼠Smad7 elisa檢測試劑盒操作步驟:
. 標準品的稀釋與加樣:在酶標包被板上設標準品孔0孔,在di一、第二孔中分別加標準品00μl,然后在di一、第二孔中加標準品稀釋液50μl,混勻;然后從di一孔、第二孔中各取00μl分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,再各取50μl分別加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。(稀釋后各孔加樣量都為50μl,濃度分別為80 ng/L,20 ng/L ,60 ng/L,30 ng/,5 ng/L)。
2. 加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品0μl(樣品最終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4. 配液:將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30(48T的20倍)倍稀釋后備用。
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。
7. 溫育:操作同3。
8. 洗滌:操作同5。
9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色5分鐘.
0. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。
. 測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后5分鐘。
人胃癌細胞;MKN-45
人侵襲性脈絡膜黑色素瘤細胞;MuM-2B
人侵襲性脈絡膜黑色素瘤細胞;MuM-2C
人肺粘液上皮樣癌細胞;NCI-H292
人低侵襲性脈絡膜黑色素素瘤細胞;OCM-A
人胃腺癌細胞;SGC-790 [SGC790]
人低分化肺腺癌細胞;SK-LU-
人乳腺導管癌細胞;ZR-75-30
人急性T淋巴細胞性白血病細胞;I 2.(CRL-2572)
人膀胱癌細胞;5637(HTB-9)
人腎透明細胞腺癌細胞;786-O [786-0]
人腎透明細胞癌;Caki-
人胰腺導管癌細胞;CFPAC-
人食管癌細胞;EC09
人結直腸腺癌細胞;HCT-5 [HCT5]
人結直腸腺癌細胞;LS 74T [LS74T]
人乳腺癌細胞;MDA-MB-468
人肺支氣管癌細胞;NCI-H650
人非小細胞肺腺癌細胞;NCI-H975
人非小細胞肺腺癌細胞;NCI-H2087
人小細胞肺癌;NCI-H2227
人非小細胞肺癌細胞;NCI-H23
人腎上腺皮質腺癌細胞;NCI-H295R
小鼠源細胞
小鼠胚胎成纖維細胞;3T3-Swiss albino
小鼠T淋巴細胞瘤細胞;Cyc-Tag(S49)
小鼠骨髓細胞;FDC-P
小鼠垂體瘤細胞;GT-
小鼠胚胎成骨細胞前體細胞;MC3T3-E
小鼠胚胎成纖維細胞;NIH/3T3
小鼠睪丸畸胎瘤細胞;P9
小鼠胚胎成纖維細胞(來自NIH3T3);PA2
小鼠血細胞;WEHI-3 [WEHI3]
小鼠成纖維細胞;φ2
小鼠紅白血病細胞;MEL
小鼠骨髓瘤細胞;Sp2/0-Ag4
小鼠垂體瘤細胞(分泌促生長激素分泌激素);AtT-20
小鼠小膠質細胞;BV2
小鼠骨髓瘤細胞;Fox-NY
小鼠胚胎成纖維細胞;MEF