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使用Elisa試劑盒進(jìn)行檢測(cè)需全面質(zhì)量控制
點(diǎn)擊次數(shù):852 更新時(shí)間:2022-01-14
  Elisa試劑盒因其操作簡(jiǎn)單,靈敏度高,特異性好,經(jīng)濟(jì)安全等特點(diǎn)而在臨床上廣泛應(yīng)用,但是由于其操作步驟復(fù)雜,一般包括試劑準(zhǔn)備,樣本收集,加樣,溫育,洗滌,顯色,比色,結(jié)果判定等,其中任何一項(xiàng)操作不當(dāng)都會(huì)對(duì)檢測(cè)結(jié)果產(chǎn)生很大影響。因此,必須加強(qiáng)ELISA檢測(cè)的全面質(zhì)量控制,保證其結(jié)果的準(zhǔn)確可靠。
 
  1.試劑
 
  好的試劑是保證檢驗(yàn)質(zhì)量的基礎(chǔ)。從4℃冰箱取出的試劑必須放置室溫20~30 min 后再啟用,否則水化層的形成可能影響試劑的原始濃度及試劑中溶質(zhì)分子的均勻分布。未用完的試劑和質(zhì)控品應(yīng)密封并及時(shí)放回冰箱保存。根據(jù)蛋白質(zhì)在冷凍過程中出現(xiàn)蛋白分子分布改變的特點(diǎn),試劑正式啟用前應(yīng)充分混勻。所用蒸餾水、去離子水和自行配制的緩沖液等,都必須調(diào)整其pH 值和離子強(qiáng)度等。不同批次的試劑在制作過程中很難保證質(zhì)量*一致,因此必須選擇和訂購(gòu)長(zhǎng)批號(hào)的試劑,并保證保存條件,嚴(yán)格執(zhí)行這一標(biāo)準(zhǔn)可以避免試劑批號(hào)改變而重建質(zhì)控體系及重新評(píng)估試劑的復(fù)雜過程,并且能夠保證結(jié)果的穩(wěn)定性。
 
  2.標(biāo)本
 
  患者標(biāo)本中有可能含有干擾試驗(yàn)的免疫物質(zhì),導(dǎo)致假陽(yáng)性或假陰性的結(jié)果,干擾因素一般可分為兩類,即內(nèi)源性和外源性干擾因素。內(nèi)源性干擾因素一般包括類風(fēng)濕因子、補(bǔ)體、高濃度的非特異性免疫球蛋白、異嗜性抗體及某些自身抗體等,避免內(nèi)源性干擾因素主要通過選擇合適的試劑;外源性干擾因素包括標(biāo)本溶血、標(biāo)本被細(xì)菌污染、標(biāo)本貯存時(shí)間過長(zhǎng)及標(biāo)本凝固等。要注意避免標(biāo)本出現(xiàn)嚴(yán)重溶血,標(biāo)本中血紅蛋白中含有血紅素基因,其具有類過氧化物的活性,因此,在以辣根過氧化物酶(HRP)為標(biāo)記的ELISA測(cè)定試驗(yàn)中,容易在溫育過程中吸附于固相,從而與加入的底物反應(yīng)顯色。標(biāo)本在低溫下保存時(shí)間過長(zhǎng),IgG可聚合成多聚體,在間接法ELISA測(cè)定中會(huì)導(dǎo)致本底加深,甚至出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果。通常血清標(biāo)本可在2~8℃保存1 周,冷凍保存時(shí)間會(huì)更長(zhǎng)。血清標(biāo)本應(yīng)充分離心,否則可因纖維蛋白原非特異吸附于微孔而造成假陽(yáng)性結(jié)果。冷凍保存標(biāo)本避免反復(fù)凍融,標(biāo)本的反復(fù)凍融會(huì)因其所產(chǎn)生的機(jī)械剪切力對(duì)標(biāo)本中的蛋白等分子產(chǎn)生破壞作用,使抗體效價(jià)下降從而引起假陰性結(jié)果。標(biāo)本的采集及分離要注意盡量避免細(xì)菌的污染。此外,標(biāo)本在凍存時(shí)會(huì)因蛋白質(zhì)局部濃縮分布不均,因此重新溶解的標(biāo)本必須混勻,但不要?jiǎng)×艺袷幒头磸?fù)顛倒。

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