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質譜兼容型蛋白磷酸酶抑制劑混合液反應五要素
點擊次數:536 更新時間:2022-03-01

質譜兼容型蛋白磷酸酶抑制劑混合液反應五要素:

參加PCR反應的物質主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+

引物:引物是PCR特異性反應的關鍵,PCR 產物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設計引物應遵循以下原則:

①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。

②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。

③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現非特異條帶。ATGC最好隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。

④避免引物內部出現二級結構,避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,產生非特異的擴增條帶。

⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數第二個堿基,應嚴格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。

⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴增的靶序列最好有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。

⑦引物的特異性:引物應與核酸序列數據庫的其它序列無明顯同源性。

引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以引物量產生所需要的結果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增,且可增加引物之間形成二聚體的機會。

內皮細胞分化G蛋白偶聯受體8抗體

神經細胞鳥苷酸置換因子NGEF抗體

磷酸化真核啟動因子2α抗體

長鏈脂肪酸延長酶ELOVL2抗體

長鏈脂肪酸延長酶長ELOVL5抗體

有脊椎動物腦發育相關蛋白Emx1抗體

外胚層神經皮層蛋白1抗體

烯醇化酶超家族成員1抗體

核苷酸內焦磷酸酶/磷酸二酯酶1抗體

內皮細胞活化蛋白受體抗體

效應細胞蛋白酶受體1抗體

早期內吞體相關蛋白1抗體

胞吞調控蛋白Eps15抗體

真核翻譯起始因子4E抗體

核輸出蛋白5抗體

腸致病性大腸桿菌抗體

E4F轉錄因子1抗體

睪酮調節細胞凋亡誘導和腫瘤抑制基因抗體

聚合酶延伸因子2抗體

聚合酶延伸因子抗體

神經生長因子調控抑制蛋白抗體

內皮細胞分化鞘脂G蛋白偶聯受體1抗體

紅細胞分化相關因子1抗體

微管相關蛋白樣蛋白3抗體

內皮抑素/內皮他丁抗體

雌激素受體β抗體


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