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大鼠促黃體生成素(LH)elisa試劑盒使用目的
點擊次數:643 更新時間:2017-03-17

Hcy Elisa試劑盒本試劑盒用于測定大鼠血清、血漿及相關液體樣本中促黃體生成素(LH)含量。
大鼠促黃體生成素(LH)elisa試劑盒實驗原理
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中大鼠促黃體生成素(LH)水平。用純化的大鼠促黃體生成素(LH)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入促黃體生成素(LH),再與HRP標記的促黃體生成素(LH)抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的促黃體生成素(LH)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中大鼠促黃體生成素(LH)濃度。 
標本要求 
.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融
2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
操作步驟
. 標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。
2400pg/ml
5號標準品
50μl的原倍標準品加入50μl標準品稀釋液
200pg/ml
4號標準品
50μl的5號標準品加入50μl標準品稀釋液
600pg/ml
3號標準品
50μl的4號標準品加入50μl標準品稀釋液
300pg/ml
2號標準品
50μl的3號標準品加入50μl標準品稀釋液
50pg/ml
號標準品
50μl的2號標準品加入50μl標準品稀釋液
2. 加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品0μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。   
4. 配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。 
7. 溫育:操作同3。
8. 洗滌:操作同5。
9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色5分鐘.
0. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。
. 測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后5分鐘以內進行。
大鼠促黃體生成素(LH)elisa試劑盒計算
以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數;或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數,即為樣品的實際濃度。 
Hcy Elisa試劑盒注意事項
.試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡5-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。
2.濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。
3.各步加樣均應使用加樣器,并經常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內,如標本數量多,使用排槍加樣。
4. 請每次測定的同時做標準曲線,做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本OD值大于標準品孔孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(n倍)后再測定,計算時請zui后乘以總稀釋倍數(×n×5)。
5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6.底物請避光保存。
7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.
8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
9.本試劑不同批號組分不得混用。
0. 如與英文說明書有異,以英文說明書為準。
大鼠促黃體生成素(LH)elisa試劑盒保存條件及有效期
.試劑盒保存:;2-8℃。
2.Hcy Elisa試劑盒有效期:6個月

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