怎樣操作ELISA試劑盒
點擊次數:611 更新時間:2017-04-20
ELISA試劑盒中,血清樣本的加入幾乎是*的要使用微量加樣器加入樣本的步驟。使用微量加樣器加樣必須注意的關鍵點是:
加樣不可太快,要避免加在孔壁上部,不可濺出和產生氣泡。加樣太快,無法保證微量加樣的準確性和均一性。加在孔壁上部的非包被區,易導致非特異吸附。濺出會對鄰近孔產生污染。出現氣泡則反應液界面有差異。
試劑的加入在國產試劑盒中基本上均是從滴瓶中滴加,除了要注意滴加的角度外,滴加的速度也很重要,滴加太快,很容易出現重復滴加或加在兩孔之間的現象,這樣就會在孔內的非包被區出現非特異吸附,從而引起非特異顯色。
用于檢測未知抗體的間接法
.用包被緩沖液將已知抗原稀釋至~0μg/ml,每孔加0.ml,4℃過夜;
2.次日洗滌3次;
3.加一定稀釋的待檢樣品(未知抗體)0.ml于上述已包被之反應孔中,置37℃孵育小時,洗滌;
4.(同時做空白、陰性及陽性孔對照)于反應孔中,加入新鮮稀釋的酶標第二抗體(抗抗體)0.ml;
5.37℃孵育30-60分鐘,洗滌;
6.zui后一遍用DDW洗滌
所以,有時候一份標本用相同的elisa試劑盒這次測定為陽性,下次測定為陰性,往往就是上述加樣及試劑的錯誤所致。