Hcy Elisa試劑盒介紹的提取主要有以下四步:
.原料處理:將新鮮的豬腸用清水仔細(xì)清洗去除內(nèi)外污物和外部皮膚脂肪后,絞碎成糜狀,并在充分?jǐn)嚢柘拢尤氲攘康乃旌虾螅偌尤肷僭S溶度為0.%的防腐劑混合均勻。
2.酶解提取:先將上述原料在充分?jǐn)嚢柘拢蒙倭肯A液精細(xì)地調(diào)節(jié)至PH值為8-9再加入事先已經(jīng)絞碎的新鮮胰漿作為酶解劑,攪勻后,緩慢升溫至40度左右,繼續(xù)攪拌,并保持料液PH=7.5-8,保持液溫于37-40度下,酶解3-4小時(shí),然后升溫至47-50度,維持PH值=8.0-8.5,再酌情補(bǔ)加少許豬胰漿后,繼續(xù)酶解4-5小時(shí),在上述酶解過(guò)程中,如果酶解料液的PH紙復(fù)查有所下降之際,就應(yīng)該及時(shí)用少許稀堿液仔細(xì)調(diào)整。鹽酸調(diào)整其PH=5.5-6,然后升溫至80度。
3.離子交換吸附;先將上述酶解提取液冷卻至室溫,仔細(xì)撈除浮于液面的油脂薄片層,控制升溫至45度,停止加熱,在攪拌下加入事先預(yù)處理好的D-254型樹(shù)脂已有效的吸附料液中的成分,新樹(shù)脂的用量一般為料液的2.55-3%,用過(guò)后的再生樹(shù)脂應(yīng)酌情加大其用量,攪拌、吸附處理3個(gè)小時(shí)后靜置過(guò)濾,濾液可作為治療冠心病的新藥冠心舒的原料。
將上述已經(jīng)吸附有肝素成分的D-254樹(shù)脂先用清水充分漂洗,干凈后,再用大約一倍的.2mol/L氯化鈉溶液對(duì)洗滌好的D-254樹(shù)脂進(jìn)行操作:*次洗脫液為樹(shù)脂體積的.5倍左右,大約洗脫4小時(shí),第二次洗脫為樹(shù)脂體積的0.5倍左右 ,洗脫時(shí)間為小時(shí)。濾干樹(shù)脂,將洗脫液予以合并。 將上述所得的洗脫液調(diào)節(jié)到PH=0-,攪拌30分鐘后,靜置6小時(shí),然后仔細(xì)的析出上層清液,下部沉淀物盡量的抽濾至干。合并清液和濾液,精細(xì)調(diào)節(jié)PH=6.0-6.5,加入.5倍量的95%乙醇沉淀過(guò)夜,翌日,仔細(xì)地烘吸出上層清液,收集下部沉淀物,抽濾至干。Hcy Elisa試劑盒經(jīng)真空烘干,即得粗品。
4.精制:將所得粗品用2%的氯化鈉溶液*溶解,制成其溶度大約為8%的溶液,在此過(guò)程中可適當(dāng)?shù)纳郎刂堋?將上述料夜用5mol/L氫氧化鈉溶液精細(xì)地調(diào)節(jié)PH=8.0-8.2,升溫至78-80度,按照每一億單位加入0.5-0.2mol/L高錳酸鉀溶液至紫紅色不再褪色時(shí)即為*次氧化操作的終點(diǎn);再加入少許飽和的亞硫酸鈉溶液以紅色剛好褪盡時(shí)為宜。 待上述料液適當(dāng)冷卻后,
精細(xì)過(guò)濾一次,當(dāng)其濾液溫度下降至36度時(shí),復(fù)濾一次,在充分?jǐn)嚢柘拢徛募尤肷倭康?%-5%,在25-27度下進(jìn)行第二次氧化,時(shí)間為6-24小時(shí),當(dāng)氧化過(guò)程結(jié)束后,將料液用“除菌過(guò)濾器"過(guò)濾,濾液用少許鹽酸調(diào)節(jié)至PH=5.8-6.5,加入0.9倍量的95%乙醇,于5-0度條件下沉淀處理24小時(shí)。 收集上述沉淀物,用少量0%氯化鈉溶液溶解后,再加上3-4倍的95%乙醇進(jìn)行沉淀,收集沉淀物。沉淀物經(jīng)無(wú)水乙醇脫水,研細(xì),再經(jīng)丙酮脫水,研細(xì),再經(jīng)丙酮脫水,Hcy Elisa試劑盒遠(yuǎn)紅外線真空烘干,即得精。