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TSZ Elisa試劑盒實驗時顯色可能碰到的問題以及解決辦法
點擊次數:776 更新時間:2017-10-09

TSZ Elisa試劑盒實驗時的操作步驟有標準品的稀釋、加樣、溫育、洗滌、顯色等等,然而在顯色這一步驟可能碰到的問題有:
、顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑;
2、加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。
相應解決辦法:
、顯色劑盡量在臨用前配制,堅持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不用;
2、加樣時保持顯色劑不外流;
3、A、B液應避免接觸金屬器械。
顯色是elisa實驗的zui后一步溫育反應,所以顯色也是重要步驟之一。
標準品的稀釋與加樣:在酶標包被板上設標準品孔0孔,在*、第二孔中分別加標準品00μl,然后在*、第二孔中加標準品稀釋液50μl,混勻;然后從*孔、第二孔中各取00μl分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,再各取50μl分別加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。(稀釋后各孔加樣量都為50μl,濃度分別為36 pg/mL,24 pg/mL ,2 pg/mL,6 pg/mL,3 pg/mL)。
加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品0μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
配液:將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30(48T的20倍)倍稀釋后備用。
洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。
加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。
溫育:操作同3。
洗滌:操作同5。
顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色5分鐘.
終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。
TSZ Elisa試劑盒測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后5分鐘以內進行。
CDGG-03954-0    5000mg/L;ml    三聚氰suan(氰尿suan)    CDGG-033320-03-00    00mg/L;00ml    DCAA Methyl Ester
CDGG-03958-02    000mg/L于叔丁基甲mi,ml    縮二脲    CDGG-03332-03-00    00mg/L;00ml    2,3-二lv丙suan甲酯 標準品
CDGG-03206-02    000mg/L;ml    雙氰胺(二聚氰胺,氰基胍) Di...    CDGG-033322-03-00    00mg/L;00ml    2,4-二溴
CDGG-032037-02    2000mg/L;ml    倍硫磷亞砜    CDGG-033684-05    00mg/L;ml    苯mi甲環唑/惡mi唑
CDGG-032043-06    00mg/L;ml    倍硫磷砜    CDGG-033685-05    00mg/L;ml    乙硫苯威
CDGG-032047-0    0mg/L;ml    禾草靈(自由suan)    CDGG-033690-03    00mg/L;ml    環唑醇
CDGG-032048-05-0    0mg/L;2x5ml    歐盟7種鄰苯二甲suan酯混標(DEH...    CDGG-0034-05-4PAK    500mg/L和5000mg/L(DIDP,DINP,DIBP)于二lv甲烷,4*ml,-0度存放    氟蟲腈
TSZ Elisa試劑盒

 

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