一、在采集樣品和分離血清時,應盡可能避免細菌污染.在一種情況下,細菌分泌的一些酶可能分解抗原和抗體等蛋白質；一些內生酶,如大腸桿菌中的?-半乳糖苷酶,會干擾以相應酶標記的測定方法.

　　二、如果用無菌手術分離血清樣本,可在2℃保存一周,如果酶聯免疫吸附試驗滅菌,建議冷凍保存,樣品應保存在-70℃以下.

　　三、冰凍血清樣本應注意避免因斷電等引起的反復凍融,反復凍融產生的機械剪切力會破壞樣品中的蛋白質和其他分子,造成假陰性結果.此外,凍融標本混合也要小心,不要劇烈振蕩,反復反混合.

　　四、應注意避免嚴重的溶血.血紅蛋白含有類似過氧化物的血紅素基團,因此,在測定HRP作為標記酶時,如果血清樣品中血紅蛋白濃度較高,則在孵育過程中容易吸附到固相,因此與HRP底物發生反應.

　　五、用細菌污染引起的混濁或絮體保存樣品時,應離心沉淀,然后取涂片進行檢測.

　　ELISA試劑盒是以免疫反應為基礎,將抗原和抗體的特異性反應與酶對底物的催化作用結合起來的一種高度靈敏的檢測技術.由于抗原和抗體的反應是在聚苯乙烯微滴定板的孔內進行的,所以添加的每一種試劑都可以通過洗滌去除多余的游離反應物,從而保證檢測結果的特異性和穩定性.用雙抗體夾心法測定樣品水平,用微孔板包覆純化抗體制成固相抗體,將固相抗體依次添加到單克隆抗體包被的微孔中,再與HRP標記的抗體結合形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,*洗滌后加入底物TMB進行抗體開發.在HRP酶催化下將ELISA試劑盒TMB轉化為藍色,在酸性作用下轉化為Zui終黃色,顏色深度與樣品呈顯著正相關,酶標儀在450 nm波長處測定吸光度（OD值）,用標準曲線計算樣品濃度.